TwistDx公司RPA产品相关知识问答

TwistDx公司RPA产品Q&A

★RPA是什么?

概念:重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37°C左右。

RPA技术原理:重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。

★TwistDx公司有哪些产品?

TwistDx公司旗下产品包括仪器耗材和试剂盒两部分,其中仪器耗材包括TwistDX T16 RPA基因荧光检测仪TwistDX T8 RPA基因荧光检测仪、Twirla便携混合培养箱、Milenia HybriDetect 2 横向流动试纸条、Milenia Genline HybriDetect 1 侧向流动试纸条、U-Star一次性核酸侧流检测盒、PowerGorilla 便携式充电器、PCRD核酸横向流动免疫检测 (NALFIA)、微珠分配器、磁力微珠和T8便携箱;试剂盒包括三类:①.TwistAmp冻干研发试剂盒(包括TwistAmp Basic试剂盒、TwistAmp exo 试剂盒TwistAmp nfo 试剂盒共三种);②. TwistAmp液态研发试剂盒(包括TwistAmp Liquid Basic 试剂盒TwistAmp Liquid exo 试剂盒共两种)。

★RPA技术有哪些特性?

快速检测 15min进行单分子检测试验, 简易包装 稳定冻干形式试剂. 无需热循环过程 摆脱任何仪器束缚. 便携 设备要求低,贫瘠条件亦能 完成检测

★RPA能实现多重化吗?

可以。RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。不过,多重化的引物组合需要精心设计,以便每个引物都能同样有效的工作。需要注意的是,RPA反应的引物总量(nmol)最好不要超标太多。如果在一个反应中使用两个以上的扩增引物,就应该控制不同引物的量。另外,我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、设备以及荧光团的兼容性。

★能否对模板进行定量?

可以。扩增子达到可检出水平的时间,依赖于反应起始时的模板量。初始模板的拷贝越多,扩增子就越快达到可检出水平。不过,这种定量需要精心的实验安排,确保对照反应是同时开始的。举例来说,可以利用镁离子的添加时间进行控制。因为镁离子一旦进入体系,RPA反应就会开始。此外,较慢的扩增过程有助于更精确的定量。我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。

★能否进行荧光终点分析?

可以。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光,荧光增强意味着发生了扩增。

★能否支持生物素或荧光标记的寡核苷酸?

支持。在RPA反应中,连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。据悉还没有发现任何差异。

★跑胶前需要回收RPA产物吗?

需要。RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳,如果不进行产物回收,跑出来的带会出现拖尾。

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