（货号：WLRN8209KIT-01）
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【产品名称】
通用名称：RNA恒温快速扩增微球试剂盒（胶体金试纸条型）-II-01
【包装规格】
货号：WLRN8209KIT-01
规格：96份/盒
【原理概述】
本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在常温恒温下，特殊修饰的反转录酶利用特异性引物和模板RNA合成cDNA链，反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。依赖nfo酶的作用，加入根据模板设计的特异的分子探针，使用胶体金技术（三明治夹心法）可以对最终结果进行检测。
【产品特点】
本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短（仅需12 min）等优点，反应组分为微球状态，操作简便，易于保存。
本试剂对设备要求低，金属浴、水浴锅等即可进行反应操作，无需购买PCR扩增仪等价格高昂的专属设备。
【引物设计】
建议使用长度在30-35 bp的引物，引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度；下游引物的5’端标记一个修饰基团（常用生物素）。引物设计避免形成二级结构而影响扩增；扩增子长度建议在150-500 bp。
【荧光探针设计】
在上下游引物中间，设计一段长度为46-52 nt与目的片段互补的序列；5’端修饰一个抗原标记（典型FAM）；在5’端和3’末端的中部位置标记一个dSpacer（四氢呋喃，THF），作为nfo的识别位点；3’末端标记一个修饰基团，例如胺基、磷酸基团或C3-Spacer等。
【试剂盒组成】
| 组成 | 含量 |
| buffer微球 | 8 份/管×12管 |
| 微球试剂 | 8 份/管×12管 |
| 使用说明书 | 1份 |
【试剂盒储存】
1．储存条件：储存温度 ≤ -20 °C（± 5 °C）恒温环境，避光保存，避免重压、反复冻融；
2．产品有效期：14个月；
3．生产日期见外包装。
【操作步骤】
- 根据待测样本，阴性和阳性对照的数量准备微球试剂，将buffer微球和微球试剂用镊子夹到反应管中，保证每个酶微球试剂配一颗buffer微球；
- 按照每个反应分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物、6 μL探针（引物探针浓度10 μM）、40.4 μL ddH2O和5 μL核酸模板（可根据实际需求调整加入模板的体积，并相应调整加入的ddH2O体积，至模板与ddH2O总体积为45.4 μL）配制反应混合液（注意：核酸模板要配制至反应混合液中，不可先复溶微球后加入模板）；
- 向每个微球反应管中加入50 μL步骤（2）配制的反应混合液，立刻迅速上下颠倒甩动反应管8-10次进行混匀；
- 混匀后，将反应液甩（或快速离心）至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中42 ºC孵育10-15 min；
- 反应结束后，取10 μL加入含有190 μL ddH2O的离心管中，混合均匀。将稀释后的扩增产物反应液取80 ~ 100μL加入试纸条的加样孔中，5 min内观察质控线与检测线判读结果。
体系配制
| 组分 | 体积（μL） |
| 上游引物(10 μM) | 2 |
| 下游引物(10 μM) | 2 |
| 探针(10 μM) | 0.6 |
| ddH2O和核酸模板 | 45.4 |
| 总体积 | 50 |
【注意事项】
1． 由于试剂盒灵敏度非常高，在进行反应时请注意避免核酸污染，并设置空白对照；
2． 使用时请取出实验所需的MIRA反应单元的数量，剩余部分请置于存储条件下。
