DNA(胶体金试纸条型)恒温快速扩增微球试剂盒-01

(货号:WLN8203KIT-01)

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【产品名称】

通用名称:DNA恒温快速扩增微球试剂盒(胶体金试纸条型)-01

【包装规格】

货号:WLN8203KIT-01

规格:96份/盒

原理概述

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在常温恒温下,重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体Rec/ssDNA,在辅助蛋白和单链结合蛋白SSB的帮助下,侵入双链DNA模板;在侵入位点形成D-loop区域,并开始对DNA双链进行扫描;待找到与引物互补的目的区域后,复合体Rec/ssDNA解体的同时,聚合酶也结合到引物的3’末端,开始链的延伸。依赖nfo酶的作用,加入根据模板设计的特异的分子探针,使用胶体金技术(三明治夹心法)可以对最终结果进行检测。

【产品特点】

本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需12 min)等优点,反应组分为微球状态,操作简便,易于保存。

本试剂对设备要求低,金属浴、水浴锅等即可进行反应操作,无需购买PCR扩增仪等价格高昂的专属设备。

 

【引物设计】

建议使用长度在30-35 bp的引物,引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度;下游引物的

5’端标记一个修饰基团(常用生物素)。引物设计避免形成二级结构而影响扩增;扩增子长度建议在150-500 bp。

【荧光探针设计】

在上下游引物中间,设计一段长度为46-52nt与目的片段互补的序列;5’端修饰一个抗原标记(典型FAM);在5’端和3’末端的中部位置标记一个dSpacer(四氢呋喃,THF),作为nfo的识别位点;3’末端标记一个修饰基团,例如胺基、磷酸基团或C3-Spacer等。

【试剂盒组成】

组成 含量
buffer微球 8 份/管×12管
微球试剂 8 份/管×12管
使用说明书 1份

试剂盒储存

1.储存条件:储存温度 ≤ -20 °C(± 5 °C)恒温环境,避光保存,避免重压、反复冻融;

2.产品有效期:14个月;

3.生产日期见外包装。

 

 

操作步骤

  • 根据待测样本,阴性和阳性对照的数量准备微球试剂,将buffer微球和微球试剂用镊子夹到反应管中,保证每个酶微球试剂配一颗buffer微球;
  • 按照每个反应分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物、6 μL探针(引物探针浓度10 μM)、40.4 μL ddH2O和5 μL核酸模板(可根据实际需求调整加入模板的体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为45.4 μL)配制反应混合液(注意:核酸模板要配制至反应混合液中,不可先复溶微球后加入模板);
  • 向每个微球反应管中加入50 μL步骤(2)配制的反应混合液,立刻迅速上下颠倒甩动反应管8-10次进行混匀;
  • 混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 ºC孵育10-15 min;
  • 反应结束后,取10 μL加入含有190 μL ddH2O的离心管中,混合均匀。将稀释后的扩增产物反应液取80 ~ 100μL加入试纸条的加样孔中,5 min内观察质控线与检测线判读结果。

 

 

 

 

 

体系配制

组分 体积(μL
上游引物(10 μM) 2
下游引物(10 μM) 2
探针(10 μM) 0.6
ddH2O和核酸模板 45.4
总体积 50

【注意事项】

1.  由于试剂盒灵敏度非常高,在进行反应时请注意避免核酸污染,并设置空白对照;

2.  使用时请取出实验所需的MIRA反应单元的数量,剩余部分请置于存储条件下。

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