DNA(基础型)恒温快速扩增试剂盒

(货号:WLB8201KIT

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产品名称

DNA恒温快速扩增试剂盒(基础型)、基础型DNA恒温快速扩增试剂盒

原理概述:

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在常温恒温下,重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体Rec/ssDNA,在辅助蛋白和单链结合蛋白SSB的帮助下,侵入双链DNA模板;在侵入位点形成D-loop区域,并开始对DNA双链进行扫描;待找到与引物互补的目的区域后,复合体Rec/ssDNA解体的同时,聚合酶也结合到引物的3’末端,开始链的延伸。

产品特点:

本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需30 mins)等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。使用金属浴、水浴锅等即可进行反应操作,无需购买PCR仪等价格高昂的设备。

引物设计:

建议使用长度在30-35 bp的引物,引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度;引物设计避免形成二级结构而影响扩增;扩增子长度建议在150-300 bp,通常不超过500 bp。

试剂盒组成:

组成 含量
A buffer 1.6 mL×1管
B buffer 150 μL×1管
正对照模板 30 μL×1管
正对照引物Mix 60 μL×1管
试剂 48份
使用说明书 1份

试剂盒储存:

运输条件:低温运输;

储存条件:储存温度 ≤ -20 ºC,避光保存,避免重压和反复冻融;

产品有效期:12个月。

 

操作步骤:提前30分钟将试剂盒所需组分取出,室温融化,震荡混匀。

1)     每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);

2)     每个反应管分别加入2 μL上游引物和2 μL下游引物(引物浓度10 μM,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中);

3)     向反应管中依次加入12.1 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为14.1 μL);

4)     最后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(请务必上下颠倒甩动反应管8-10次进行混匀;对于多个反应,建议将B buffer加至反应管的盖子内侧上下颠倒后混匀);

5)     混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 ºC孵育30 mins;

6)     反应结束后,加入50 μL酚/氯仿,1:1抽提反应液,12000 rpm离心5 mins,取5 μL上清进行琼脂糖凝胶电泳检测。

体系配制

组分 体积(μL)
A buffer 29.4
上游引物(10 μM)* 2
下游引物(10 μM)* 2
ddH2O和DNA模板 14.1
B buffer 2.5
总体积 50

*正对照反应单元体系配制:正对照模板加入2μL,加入4 μL正对照引物Mix(包含上/下游引物),其他组分参照体系配制。

注意事项:

1.  由于试剂盒灵敏度非常高,在进行反应时请注意避免核酸污染,并设置空白对照;

2.  使用时请取出实验所需的MIRA反应单元的数量,剩余部分请置于存储条件下。

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