基础型RNA恒温快速扩增试剂盒

(货号:WLRB8204KIT

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原理概述:

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在恒温条件下(42 °C),特殊修饰的反转录酶利用特异性引物DNA和模板RNA合成cDNA链,反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。适用于实验室级别的RNA扩增以及其他检测用途的RNA扩增使用。

产品特点:

本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需30 mins)等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。

本试剂对设备要求低,金属浴、水浴锅等即可进行反应操作,无需购买PCR扩增仪等价格高昂的专属设备。

引物设计:

建议使用长度在 30-35 bp的引物,引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度;引物设计避免形成二级结构而影响扩增;扩增子长度建议在150-300 bp,通常不超过500 bp。

试剂盒组成:

组成 含量
A buffer 1.6 mL×1管
B buffer 150 μL×1管
试剂 48份
使用说明书 1份

试剂盒储存:

运输条件:低温运输;

储存条件:储存温度 ≤ -20 ºC,避光保存,避免重压、反复冻融;

产品有效期:12个月。

 

操作步骤:提前30分钟将试剂盒所需组分取出,室温融化,震荡混匀

1)    每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);

2)    每个反应管分别加入2 μL上游引物和2 μL下游引物(引物浓度10 μM,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中);

3)    向反应管中依次加入12.1 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为14.1 μL);

4)    最后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(对于多个反应,建议将B buffer加至反应管的盖子内侧,上下颠倒反应管8-10次混匀);

5)    混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入恒温设备中42 ºC孵育30 mins;

6)    反应结束后,加入50 μL酚/氯仿,1:1抽提反应液,12000 rpm离心5 mins,取5 μL上清进行电泳检测。(或者使用DNA产物纯化试剂盒处理反应液后进行电泳检测)

体系配制

组分 体积(μL)
A buffer 29.4
上游引物(10 μM) 2
下游引物(10 μM) 2
ddH2O和RNA模板 14.1
B buffer 2.5
总体积 50

注意事项:

1.  由于试剂盒灵敏度非常高,在进行反应时请注意避免微量核酸染,并尽量考虑设置空白对照以确认是否有核酸污染。

2.  试剂盒保质期12个月。每次使用时,请取出实验所需的MIRA反应单元的数量,置于冰浴条件下并在8小时内使用;剩余部分,请置于存储条件下。

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